Hibridoma

Un hibridoma es una célula resultante de la hibridación artificial de células linfoides de mamíferos normales y células de mieloma de tumores malignos del sistema inmunológico .

Interesar

El hibridoma combina las propiedades de las dos células iniciales: producción específica de anticuerpos para el linfocito e inmortalidad para la célula cancerosa.

Los hibridomas dan líneas inmortalizadas estables que producen anticuerpos monoclonales . Se utilizan para producir grandes cantidades de anticuerpos monoclonales utilizados como reactivos en investigación, para el establecimiento de diagnósticos, o para producir determinados fármacos basados ​​en anticuerpos monoclonales, especialmente utilizados en oncología (p. Ej., Trastuzumab en cáncer de mama ) pero también en otras patologías. (infliximab contra la artritis reumatoide y la enfermedad de Crohn ).

Histórico

Para diversas aplicaciones, se requieren grandes cantidades de anticuerpos puros y específicos.

Sin embargo, al producir anticuerpos mediante la inyección de un antígeno, se recurre a varios linfocitos B, lo que da lugar a una heterogeneidad de anticuerpos.

En 1975 , Cesar Milstein y Georges Köhler del Medical Research Council en Cambridge , Inglaterra, buscaron una forma de producir un solo tipo de anticuerpo. Eludieron el problema de la heterogeneidad de los anticuerpos aislando células capaces de producir el anticuerpo deseado y tratando de cultivarlas. Desafortunadamente, las células capaces de producir los anticuerpos, las células plasmáticas , no pudieron desarrollarse en cultivo. Pensaron en usar células de mieloma maligno porque son las células más cercanas a las células deseadas y crecen rápidamente, eternamente y producen grandes cantidades de anticuerpos. Pero estos no responden a un antígeno en particular; producen el anticuerpo del linfocito B normal antes de que se vuelva maligno . El equipo de Milstein y Köhler combinaron las propiedades de estas dos células para obtener células híbridas llamadas hibridomas.

Métodos

La producción de hibridomas pasa por las siguientes etapas:

  1. el antígeno se inyecta en un ratón para provocar la proliferación de células que producen el anticuerpo específico
  2. luego se extrae el bazo y se disocia en células aisladas; estas células del bazo pueden sintetizar la enzima hipoxantina-guanina fosforribosiltransferasa (HGPRT). Esta enzima es necesaria para la síntesis exógena de purinas .
  3. Las células de mieloma maligno que serán deficientes en HGPRT y tomadas de la misma línea de animales, se fusionan, gracias a un agente fusinogénico como el polietilenglicol , con los linfocitos productores de anticuerpos, haciendo que los híbridos sean inmortales .
  4. Las células híbridas (hibridomas) se separan de las células no fusionadas colocando la mezcla en un medio de cultivo HAT específico que evita la síntesis de purinas de forma endógena. Por lo tanto, solo los híbridos pueden sobrevivir, ya que estos híbridos pueden producir la enzima HGPRT a través de las células plasmáticas. Los hibridomas crecen y se aíslan limitando la dilución
  5. Cada hibridoma se prueba para verificar su capacidad para unirse al antígeno.
  6. los hibridomas se amplifican, ya sea por cultivo celular ( in vitro ) o en fluidos ascíticos (in vivo).

nota: Los hibridomas pueden congelarse para su almacenamiento.

Utilidad

Los hibridomas producen anticuerpos monoclonales que pueden servir como sondas muy específicas. Esta función es muy útil para el diagnóstico médico. Los anticuerpos se utilizan para medir la concentración de proteínas específicas en la sangre o la orina, por ejemplo, una prueba de embarazo que detecta la presencia de una proteína. Los anticuerpos monoclonales también se pueden usar para la purificación de proteínas. El método del hibridoma es muy útil como agente terapéutico en el tratamiento de enfermedades humanas.

Ver también

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Enlace externo

Bibliografía

Notas y referencias

  1. "  Hibridomas de rata y anticuerpos monoclonales".  » , En www.gazettelabo.fr (consultado el 8 de abril de 2020 )
  2. (in) "  Una tecnología de fusión de polietilenglicol de corta duración para aumentar la producción de hibridomas secretores de anticuerpos monoclonales  " , Journal of Immunological Methods , vol.  81 n o  2,2 de agosto de 1985, p.  223–228 ( ISSN  0022-1759 , DOI  10.1016 / 0022-1759 (85) 90207-8 , leído en línea , consultado el 8 de enero de 2019 )