El inmunohistoquímico ( IHC ) es un método de localización de proteínas en las células de un corte de tejido, para la detección de antígenos mediante anticuerpos .
La inmunohistoquímica aprovecha el hecho de que un anticuerpo se une específicamente a antígenos en tejidos biológicos. Los anticuerpos pueden ser de origen policlonal o monoclonal , siendo los anticuerpos monoclonales más específicos en esencia.
La inmunohistoquímica toma su nombre de la raíz "inmuno", refiriéndose al anticuerpo utilizado en el procedimiento, de la palabra " química " y de la palabra " histología " que se refiere al estudio de tejidos biológicos (comparar con inmunocitoquímica). ).
Un par anticuerpo-antígeno se puede visualizar de varias formas. En la mayoría de los casos, el anticuerpo se conjuga con una enzima (por ejemplo, peroxidasa ) que puede catalizar una reacción de producción de color ( por ejemplo, tinción con inmunoperoxidasa). Los anticuerpos también se pueden marcar con un fluorocromo (por ejemplo: FITC , rodamina , rojo Texas o Alexa Fluor): ver inmunofluorescencia .
La inmunohistoquímica se utiliza ampliamente para el diagnóstico y / o seguimiento de cánceres mediante la detección de células anormales como las que se encuentran en los tumores cancerosos.
Por tanto, hoy en día se conocen marcadores específicos para varios cánceres:
Estos marcadores moleculares son característicos de ciertos eventos celulares como la proliferación o muerte celular (apoptosis).
La IHC también se usa ampliamente en la investigación básica para comprender la distribución y localización de biomarcadores y proteínas expresadas diferencialmente en diferentes partes del tejido biológico.
La tela se coloca sobre un soporte sólido. El anticuerpo se agrega a la preparación de tejido, uniéndose específicamente a la proteína que se detectará en ese tejido. La adición de un anticuerpo primario ligado a un sistema de detección (enzima ligada al anticuerpo, cuya presencia del sustrato provoca una reacción coloreada (peroxidasa) o fluorescente (rodamina), provocando una señal visible a simple vista, o por microscopía y técnicas espectrofotométricas. sí
Existen principalmente dos métodos relacionados con la inmunohistoquímica y la detección de antígenos en tejidos biológicos:
El "método directo" es un método de tinción de un solo paso. Utiliza un anticuerpo marcado (es decir, antisuero conjugado con FITC ) que reacciona directamente con los antígenos presentes en las secciones de tejido. Dado que solo se usa un anticuerpo, el procedimiento es corto y rápido. Sin embargo, carece de sensibilidad debido a la baja amplificación de la señal y rara vez se ha utilizado desde la introducción del método indirecto.
El "método indirecto" emplea un anticuerpo primario no marcado (primera capa) que reacciona con antígenos dentro del tejido, un anticuerpo secundario marcado (segunda capa) que reacciona con el anticuerpo primario. El anticuerpo secundario debe dirigirse contra la inmunoglobulina G del anticuerpo primario. Este método muestra una mejor sensibilidad gracias a la amplificación de la señal que es posible gracias a varias reacciones del anticuerpo secundario en diferentes sitios antigénicos del anticuerpo principal. La segunda capa de anticuerpo se puede marcar con un tinte fluorescente como FITC, Rhodamine o Texas Red , que se denomina método de inmunofluorescencia indirecta. La segunda capa de anticuerpo también se puede marcar con una enzima como peroxidasa , fosfatasa alcalina o glucosa oxidasa . Esta última variante se denomina método de inmunoenzima indirecta. Proporcionar un sustrato para estas enzimas permite establecer la presencia de la enzima (y por tanto del anticuerpo) de forma cuantificable.
El anticuerpo PEA3 se usa para buscar la proteína ETV4 que se expresa en grandes cantidades en el sarcoma de células redondas de Ewing.
El sarcoma de células redondas de Ewing es un cáncer muy agresivo que ataca principalmente a los huesos y tejidos blandos en personas bastante jóvenes. Está vinculado a una translocación * a nivel de los genes CIC - DUX4, que producirán una sobreexpresión de la proteína ETV4.
PEA3 es un anticuerpo monoclonal * de ratón. Es decir, se inyectó al ratón el antígeno humano deseado (ETV4) en el sarcoma de células redondas de Ewing, para crear una respuesta inmune en el ratón y para que pueda producir los anticuerpos que se utilizarán para inmunohistoquímica.
Leer la ficha técnicaPrimero, para realizar una reacción antígeno / anticuerpo, el tejido encerado del portaobjetos debe rehidratarse. Entonces, haga los pasos inversos donde colocamos el tejido en parafina.