La tinción de Gram debe su nombre al bacteriólogo danés Hans Christian Gram que desarrolló el protocolo en 1884. Es una tinción que permite resaltar las propiedades de la pared bacteriana y utilizar estas propiedades para distinguir y clasificar las bacterias. Su ventaja es que proporciona información rápida, fácil y económica sobre las bacterias presentes en un producto o medio, tanto en términos de tipo como de forma.
Así, los científicos pueden distinguir las bacterias Gram-positivas - también conocidas como "Gram-positivas" - con una sola pared con gran cantidad de peptidoglicano , de las bacterias Gram-negativas, compuestas por menos peptidoglicano pero con una membrana externa adicional. Este tipo de clasificación no deja de tener consecuencias en el campo médico (la resistencia de las bacterias y la eficacia de los antibióticos según el tipo de bacteria).
Requiere tener un frotis fijo, ya sea
Aquí están las diferentes etapas de esta coloración:
Los pasos 1 y 2 colorean el contenido de las bacterias de color púrpura . La violeta de genciana se une a los componentes citoplasmáticos de todas las bacterias. Lugol corrige esta coloración interna.
El paso 3 (alcohol) se utiliza para decolorar el citoplasma de las bacterias que se denominarán " Gram negativas ". De hecho, estos tienen una pared pobre en peptidoglicanos , por lo tanto más fina, que dejará pasar el alcohol (molécula hidrófila ) o la mezcla de alcohol y acetona, y que decolorará el citoplasma al eliminar la violeta de genciana. Por el contrario, para las llamadas bacterias " Gram positivas " , la pared constituye una barrera impermeable al alcohol porque está compuesta por una "capa" más grande de peptidoglicanos. Por tanto, la pared es más gruesa. Entonces, las bacterias permanecerán de color púrpura.
El paso 4 es una contratinción con el objetivo de dar a las bacterias Gram-negativas previamente decoloradas un tinte rosado que permita visualizarlas bajo un microscopio. Las bacterias Gram-positivas quedaron violetas obviamente insensibles a este contra color más pálido que el púrpura que impregna su citoplasma.
La tinción de Gram permite así diferenciar la pared bacteriana y dividir las bacterias en dos grandes grupos:
Estas diferencias de coloración y las diferencias de forma ( bacilos o cocos ) están en el origen de la clasificación de las bacterias.
Nota : Algunas bacterias permanecen insensibles a esta coloración, este es el caso, entre otras, de Mollicutes , o llamadas Ténéricutes, una de las tres clases principales de Eubacterias (Gracilicutes, Firmicutes, Ténéricutes). De hecho, estas bacterias carecen de pared y aparecen Gram -.
La tinción de Gram se utiliza con frecuencia en microbiología para detectar bacterias Gram positivas o negativas. Esto permite diferenciar y clasificar las diferentes poblaciones de microorganismos. Por ejemplo, cuando hay sospecha de infección del organismo en una biopsia, esta tinción se puede utilizar seguida de un análisis histopatológico para hacer un diagnóstico. Este método tiene la ventaja de ser más rápido que un cultivo convencional.
Las bacterias detectadas se clasifican en dos categorías. A modo de ejemplo:
El propósito de este método es confirmar rápidamente si una bacteria es Gram positiva o Gram negativa sin pasar por los pasos de tinción habituales y sin usar un microscopio. Basta con poner en contacto (en un portaobjetos de microscopio) una colonia aislada con una gota de una solución de hidróxido de potasio ( KOH ) al 3%. Usando una pipeta Pasteur , mezclamos. Unos segundos más tarde, la mezcla se tira hacia arriba. Si se forma un filamento entre la pipeta y el portaobjetos, la colonia aislada se compone de bacterias Gram negativas; si la pipeta no arrastra nada, se trata de bacterias Gram positivas. El método fue propuesto como un control de calidad para la tinción de Gram en 1977. Durante una evaluación (John Buck, 1982) los resultados obtenidos por este método en 400 cepas de bacterias marinas fueron confirmados por la tinción de Gram.