Fluoresceína | |
Identificación | |
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Sinónimos |
Solvent Yellow 94, D&C Yellow No. 7, Japan Yellow 201, Soap Yellow F, Acid Yellow 73, 3 ', 6'-fluorandiol |
N o CAS |
(sal de Na) |
(ácido),
N o ECHA | 100,017,302 |
N o CE | 219-031-8 208-253-0 (Na) |
Código ATC | S01 |
PubChem | 16850 |
Sonrisas |
C12 (c3c (cccc3) C (O2) = O) c2c (Oc3c1ccc (c3) O) cc (O) cc2 , |
InChI |
InChI: InChI = 1 / C20H12O5 / c21-11-5-7-15-17 (9-11) 24-18-10-12 (22) 6-8-16 (18) 20 (15) 14- 4-2-1-3-13 (14) 19 (23) 25-20 / h1-10,21-22H |
Propiedades químicas | |
Fórmula bruta |
C 20 H 12 O 5 [Isómeros] |
Masa molar | 332.3063 ± 0.0183 g / mol C 72.29%, H 3.64%, O 24.07%, |
Propiedades físicas | |
T ° fusión | 315 ° C ( descomposición ) |
Propiedades ópticas | |
Espectro de absorción | λmáx 494 nm |
Precauciones | |
Directiva 67/548 / CEE | |
Frases S : S22 : No respirar el polvo. S24 / 25 : Evítese el contacto con la piel y los ojos. Frases S : 22, 24/25, |
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Unidades de SI y STP a menos que se indique lo contrario. | |
La fluoresceína ( C 20 H 10 Na 2 O 5 en el caso de la sal de sodio , C 20 H 12 O 5 o 3H-xanteno-3-ona), o uranina , es una sustancia química compleja compuesta por dos moléculas de fenoles relacionados con un anillo de pirano unido a un ácido benzoico . Esta sustancia derivada del xanteno , ácido, de color rojizo visto en transparencia, es verde fluorescente visto por reflejo de la luz del día, emite luz fluorescente cuando se excita bajo rayos ultravioleta .
Esta sustancia fue descubierta y sintetizada por Adolf von Baeyer en 1871 . Von Baeyer llamará a su descubrimiento "resorcinftaleína", ya que se sintetiza a partir de resorcinol y anhídrido ftálico . El nombre "fluoresceína" se remonta a 1878 .
La hidrofilia de la fluoresceína se utiliza en diferentes campos para colorear el agua.
HidrogeologíaSiendo su color visible incluso a dosis bajas, la fluoresceína se utiliza para rastrear corrientes subterráneas , resurgimientos, fugas, etc.
Redes de aguas residualesAsimismo, la fluoresceína se utiliza para pruebas en redes de aguas residuales, para encontrar el camino de redes poco entendidas, para identificar inversiones entre redes de aguas residuales y pluviales, etc.
Monitoreo de evacuación de agua de plantas geotérmicasLas plantas geotérmicas utilizan fluoresceína para seguir la propagación de las corrientes de agua caliente expulsadas al mar. La planta geotérmica de Bouillante en Guadalupe utiliza este elemento para verificar que las fuentes de agua caliente detectadas por el mar son naturales y no agua calentada por la salida de la planta cercana.
IndustrialPermite la detección de la presencia de fugas en circuitos hidráulicos complejos (aceite y combustible), en particular en vehículos de transmisión hidráulica ( cilindro , conexión, etc.).
Seguridad MaritimaTambién se utiliza como medio de señalización de emergencia fácilmente transportable en embarcaciones de navegación. Si es necesario, la mancha formada por el producto facilita enormemente la detección aérea, en particular para embarcaciones pequeñas (kayak de mar, etc.).
Se usa en ciertos medicamentos (p. Ej., Eosina ).
En biología molecular, se utiliza para fabricar sondas para hibridaciones fluorescentes in situ (o FISH), PCR en tiempo real e hibridación genómica comparativa .
En oftalmología, ha sido ampliamente utilizado en inyección, para angiografías del fondo del ojo en fluorescencia, pero enJunio de 2002, la Agencia Francesa para la Seguridad Sanitaria de los Productos Sanitarios ha impuesto, de acuerdo con el fabricante, la suspensión de la Autorización de Comercialización de este medicamento y la retirada de todos los lotes de FAURE solución inyectable de fluoresceína sódica al 20%, debido a reacciones de hipersensibilidad severa más frecuentes con fluoresceína al 20% que con fluoresceína al 10% (que sigue autorizada).
A1 er de octubre de de 2004En Francia, se notificaron 23 casos de efectos adversos graves, incluidos 5 casos concluidos por la muerte del paciente, con la sustitución de la fluoresceína por la especialidad AK-Fluor. Los efectos secundarios leves observados son (aislados o combinados):
A veces, estos síntomas leves de alergia pueden seguir efectos más graves, minutos u horas después de la inyección:
y más raramente:
Una reacción inflamatoria y dolor local pueden resultar de la difusión del producto fuera de la vena durante la inyección. La conjuntiva, la piel y la orina son temporalmente de color amarillo fluorescente unas horas después del examen.
También se utiliza durante el examen de la córnea para visualizar las lesiones de ésta: abrasiones o perforación ( signo de Seidel positivo ).
En cirugía puede ayudar a planificar (en modo preoperatorio) incisiones de tejidos blandos necróticos de manera más eficiente, resaltando la perfusión tisular. También puede mejorar el manejo postoperatorio de infecciones necrotizantes. En la década de 1980, un instrumento médico dedicado a la evaluación del flujo sanguíneo cutáneo en función del aporte cutáneo de fluoresceína sódica es el “dermofluorómetro digital”.
Para usos médicos; Debido al riesgo raro pero grave de epilepsia y / o shock anafiláctico , la fluoresceína ahora se reemplaza con frecuencia por verde de indocianina (ICG o verde de indocianina (en) ). El nombre comercial de este producto en el mercado francés es Infracyanine .
La fluoresceína sirve como donante en la construcción de sondas de PCR en tiempo real .
Se informan efectos adversos (leves a mortales) para el 1% al 6% de los usuarios, según el estudio. Las tasas más altas podrían reflejar casos que probablemente hayan estado más expuestos o que ya hayan presentado efectos secundarios similares (alergias ...). El riesgo de una reacción adversa es 25 veces mayor si la persona ha tenido una reacción adversa en el pasado. Por el contrario, este riesgo disminuye en personas que han usado previamente ( profilácticamente ) antihistamínicos . Una simple prueba de mordida puede ayudar a identificar a quienes corren mayor riesgo de sufrir una reacción adversa.
En los seres humanos, en 2006 , la aplicación a la piel se consideró segura; la inyección intradérmica puede causar picazón o dolor leve. Y en especial por vía intravenosa (pero inducciones orales o tópicos también se han reportado), fluoresceína puede causar varios efectos secundarios que incluyen náuseas , vómitos , urticaria , aguda hipotensión , malestar vagal , anafilaxia o incluso shock anafiláctico. Que puede conducir a un paro cardíaco o muerte rápida de choque anafiláctico.
¿Mutagenicidad? Los estudios han informado sobre un posible carácter mutagénico o una posible activación fotodinámica de varios tintes alimentarios o cosméticos (incluido el tinte para el cabello ) a base de fluoresceína; Varios de estos productos fueron luego probados (publicación de 1981 ) en ADN bacteriano ( pruebas de reparación de ADN bacteriano ) para estos dos aspectos (activación fotoquímica y / o mutagenicidad intrínseca): 2,4,5,7-tetrayodofluoresceína, sal disódica (eritrosina) ; Se ensayaron floxinas (2,4,5,7-tetrabromo-12,15-diclorofluoresceína; sal dipotásica y sal disódica de 2,4,5,7-tetrayodo-12,15-diclorofluoresceína) (con y sin iluminación de lámpara fluorescente a la luz del día). Resultados: la eritrosina estuvo inactiva en todas las condiciones y ambos colorantes de floxina fueron activos en un ensayo, pero solo en ausencia de metabolismo. Las pruebas de reparación del ADN bacteriano no se consideraban en ese momento 100% fiables, después de este estudio, aún persistían dudas sobre la posible genotoxicidad de algunos de estos colorantes.
Notas :
Todavía se discute y podría variar según los taxones, la edad de los organismos, la duración y concentración de la exposición, las sinergias con otros compuestos o contaminantes ... Se considera su ecotoxicidad directa a las dosis bajas que se encuentran habitualmente en los experimentos de rastreo de agua. bajo. La toxicidad de sus productos de degradación (que podrían ser más tóxicos que la molécula madre) solo se ha estudiado recientemente (Gombert et al.2017 citado por CJ Cooksey en 2017). Las diferentes formas de fluoresceína son degradadas por la luz y por ciertos microorganismos (agua, sedimento o suelo); La medición de la hidrólisis del diacetato de fluoresceína en una muestra de suelo o sedimento también se usa a veces para medir la actividad microbiana total en estos sustratos. Dado que la hidrólisis completa del diacetato de fluoresceína requiere los tres grupos principales de enzimas ( esterasas , proteasas y lipasas ), el ensayo hidrolítico del diacetato de fluoresceína (FDAasa) ha sido propuesto como una medida holística de la actividad microbiana total, por Schnürer y Rosswall en 1982.
Muchas pruebas básicas de ecotoxicidad (aguda a crónica) se basan en los efectos de las moléculas probadas en un microcrustáceo acuático de agua dulce muy común ( alimentador de filtración) : la dafnia ( Daphnia pulex ). En ecotoxicología , un parámetro importante es la reprotoxicidad .
Para una exposición crónica de 10 días a la fluoresceína en condiciones "estáticas", se observa una disminución (dependiente de la dosis) en el número promedio de descendientes viables producidos por la dafnia expuesta. Sin matar a los adultos, esta molécula puede por tanto afectar el potencial reproductivo de los organismos expuestos. Sin embargo, según Walthall y Stark (1991), cuando el producto se diluye fuertemente en agua, "el riesgo que representaría para las poblaciones silvestres después de aplicaciones a gran escala parece mínimo" , especialmente porque el tinte se degrada con bastante rapidez. a la luz del sol .
Se sabe que la fluoresceína se une a las proteínas , incluso en ciertos tejidos vivos que cobran vida (esta propiedad se utiliza incluso para detectar lesiones corneales y úlceras cutáneas en peces de piscifactoría (incluida, por ejemplo, la trucha arco iris). Cielo ( Oncorhynchus mykiss ), bagre ( Ictalurus punctatus ), goldfish ( Carassius auratus ) y lubina rayada híbrida ( Morone saxatilis macho X Morone chrysops hembra) Dosis mínimas en agua (0,10 mg por mililitro de agua durante 3 minutos son suficientes) producen lesiones y úlceras en la piel de los peces visibles con precisión, invisibles a simple vista; peces aparentemente clínicamente sanos revelan así ulceraciones que provocan lesiones durante la manipulación, parasitosis, etc. Otro estudio (sobre tilapia del Nilo ( Oreochromis niloticus ) y bagre de pequeña escala ( Clarias gariepinus )) concluyó que este tinte es inofensivo para la tilapia del Nilo hasta 0.5 mg de flúor. ceína / ml de agua para una exposición inferior a 15 min, 0,10 mg / ml durante 5 min es suficiente para detectar abrasiones cutáneas muy pequeñas).
Atención, para facilitar la manipulación necesaria para la valoración clínica de los peces, estos suelen estar dormidos con tricaína (mesilato de tricaína ), pero este anestésico (el más utilizado) interactúa con la fluoresceína: por un lado puede causar daños importantes a los peces, y por otro lado "apagar la fluorescencia emitida por la fluoresceína retenida en las úlceras cutáneas" , y por tanto distorsionar la prueba con falsos negativos; esto se ha demostrado en el fletán del Pacífico ( Hippoglossus stenolepis ), el abadejo de Groenlandia ( Theragra chalcogramma ) y el lenguado del norte ( Lepidopsetta polyxystra ) al examinar la fluorescencia de las lesiones epidérmicas inducidas experimentalmente.
Un experimento consistió en exponer lubinas de cultivo sanas o ulceradas experimentalmente a una fluoresceína "alta" en el agua, lo que, según los dos autores del experimento, no tuvo ningún efecto aparente en su salud o supervivencia a corto plazo.
Como trazador de aguas subterráneas muy utilizado (en zonas kársticas en particular), esta molécula puede reaparecer en concentraciones aún significativamente altas en fuentes ubicadas hidráulicamente aguas abajo del punto de inyección donde pueden vivir especies raras, amenazadas o protegidas. En 2012, un estudio probó su toxicidad (en exposiciones estáticas de 24 y en varias concentraciones) para el caracol en peligro de extinción Taylorcocha serpenticola a través de una "especie sustituta" , el caracol grislag Fluminicola fuscus (con controles sin fluoresceína a temperaturas similares a las de el hábitat en cuestión). La concentración letal media fue de 377 mg / L para la especie sustituta; lo que sugiere que los riesgos para los moluscos en contacto con agua coloreada son "probablemente bajos" .
Algunas granjas de acuicultura consumen grandes cantidades de agua dulce o agua de mar "subterránea". Necesitan comprender mejor el estado y los movimientos de este recurso subterráneo, incluido el uso de tintes fluorescentes como la fluoresceína. Al hacerlo, los peces o camarones cultivados ocasionalmente pueden estar expuestos a él. En este contexto, se evaluó la toxicidad aguda de la fluoresceína para el rodaballo ( Scophthalmus maximus ) a concentraciones de 0,5, 0,7, 0,9, 1,1 y 1,3 mg) a 14 ° C durante 24, 48 o 96 h. Resultado: la dosis que mata al 50% de los peces (CL50) fue de 997,1 +/- 11,4 mg / L (media +/- desviación estándar) después de una exposición de 24, 48 o 96 h. El sistema nervioso central del rodaballo se ve afectado por la molécula; y la autopsia mostró una tinción marrón verdosa de algunos tejidos con congestión encefálica . Esta CL50 deja un amplio margen de seguridad a las dosis esperadas después de la dilución (<1 mg / L).
La fluoresceína no debe confundirse con la pioverdina producida naturalmente en cantidades muy pequeñas por diferentes organismos vivos. La pioverdina es un sideróforo producido en particular por determinadas bacterias. En ocasiones se utiliza para su identificación y caracterización biológica y molecular, como ocurre con Pseudomonas spp. fluorescentes (incluida Pseudomonas syringae ) o Xanthomonas fragariae (que a veces son fitopatógenas ).
La pioverdina es una toxina biológica, que se encuentra en formas químicas ligeramente diferentes, a las que corresponden los receptores celulares (que pueden aceptar diferentes formas de pioverdina). Podría tener varias funciones que aún no se conocen bien. Las pioverdinas tienen una afinidad química por el hierro férrico (ion Fe3 +) mayor que la de los sideróforos producidos por hongos fitopatógenos, incluido Fusarium (fusarininas), lo que otorga a los microbios una ventaja competitiva o adaptativa, lo que les permite convertirse en "antagonistas" de otros grupos microbianos menos. capaz de capturar este hierro cuando su disponibilidad es limitada.
A través de mutaciones dirigidas al sitio, los investigadores han producido bacterias mutantes ( P. syringae ) que no producen ni incorporan pioverdina. Demostraron que, al igual que la enzima nitrato reductasa , la pioverdina está involucrada en la competencia rizosférica pero también telúrica (capacidad de usar el suelo como hábitat) de P. syringae C7R12 (que, gracias a la nitrato reductasa, tiene competencia saprofita que le permite respirar bajo condiciones anóxicas ). También se demostró a finales de la década de 1990 que la pioverdina producida por bacterias era un buen ligando capaz de formar complejos con otros metales, incluidos los actínidos , en determinadas condiciones de pH. Se desarrolló una prueba de HPLC en el CRA-W belga, que confirmó la constancia de la pioverdina producida en más de 500 cepas de P. syringae.