Antibiótico

Un antibiograma es una técnica de laboratorio diseñada para evaluar la sensibilidad de una cepa bacteriana a uno o más antibióticos sospechosos o conocidos.

El principio consiste en colocar el cultivo de bacterias en presencia de uno o más antibióticos y observar las consecuencias sobre su desarrollo y supervivencia. Por ejemplo, se pueden colocar varias tabletas empapadas en antibióticos sobre una cepa bacteriana colocada en una placa de Petri . Existen tres tipos de interpretación según el diámetro de la zona de inhibición que rodea al disco antibiótico: bacterias sensibles, intermedias o resistentes al antibiótico.

Realizar un antibiograma

Equipo

Pasos

Hacer una suspensión

Hay dos posibles soluciones:

O tiene un caldo de cultivo de 24 horas (fase estacionaria), puede usarlo de la siguiente manera:

  • para grampositivos, realice una dilución 1/500;
  • para gramnegativos, realice una dilución 1/5000.

O tiene colonias puras en un medio de cultivo, en este caso:

  • esterilizar agua fisiológica en un tubo de hemólisis;
  • tomar las colonias puras y suspenderlas hasta obtener la misma opacidad que el estándar Mac Farland 0.5;
  • si la suspensión está demasiado turbia, ajuste la opacidad agregando agua fisiológica.
Preparación de agar
  • tomar agar Mueller-Hinton, verificar que no haya agua en la superficie; si lo hay, deje secar;
  • anote dónde se colocarán los discos de antibiótico en la parte inferior de la caja (deben colocarse al menos a 1 cm del  borde);
  • (consejo: divida la caja tantas veces (máximo 5 para una caja de 10  cm , o 12 para una caja de 15  cm ) como tenga antibióticos, o utilice una plantilla);
  • inocular el agar con 1 mL de suspensión;
  • extienda el volumen con el rastrillo desde el centro hacia los bordes;
  • o sumerja el hisopo en la suspensión, elimine el exceso de inóculo presionando los bordes del tubo, frote el agar regularmente girando la placa 60 ° hasta que toda la superficie esté inoculada;
  • déjelo secar de 3 a 5 minutos;
  • deje caer los discos de antibióticos;
  • incubar 24 h.
Leer los resultados
  • Mida los diámetros de los halos (zonas de inhibición del crecimiento de la cepa microbiana).

Para cada cepa microbiana, la sensibilidad o resistencia a un antibiótico es diferente. Utiliza los conceptos de concentración crítica inferior (c) y concentración crítica superior (C).

  • c: dosis mínima de antibiótico que un paciente puede recibir de forma segura y que tiene un efecto sobre la cepa bacteriana.
  • C: dosis máxima de antibiótico que un paciente puede recibir de forma segura y que tiene un efecto sobre la cepa bacteriana.

Farmacocinética: en alguien tratado adecuadamente con un antibiótico, se espera que la concentración de antibiótico en el cuerpo oscile entre las concentraciones críticas superior e inferior.

Estos datos están disponibles en gráficos.

Para cada par bacteria-antibiótico, se determina una concentración inhibitoria mínima (o MIC). La MIC es la concentración más pequeña de antibiótico que inhibe cualquier crecimiento visible. Comparando la CMI con concentraciones críticas, se determina la sensibilidad o resistencia de las bacterias al antibiótico.

  • las bacterias son sensibles al antibiótico cuando la CMI está por debajo de la concentración crítica más baja. Concretamente, esto significa que una baja concentración de antibiótico es suficiente para matar las bacterias y que esta dosis necesaria es incluso menor que la dosis más baja que se puede administrar en humanos. Entonces, en resumen, si tratamos a alguien con el antibiótico, la concentración del mismo en el cuerpo siempre será suficiente para matar las bacterias.
  • las bacterias son resistentes al antibiótico cuando la CMI es mayor que la concentración crítica superior. Concretamente, la dosis necesaria para matar bacterias es demasiado alta para ser tolerada en humanos sin efectos secundarios significativos. Este antibiótico no se puede usar para tratar una infección.
  • las bacterias son intermedias al antibiótico cuando la CMI se encuentra entre las dos concentraciones críticas. En la práctica, esto corresponde a una situación en la que la concentración es a veces suficiente para matar bacterias, a veces insuficiente. Se debe considerar que las bacterias serán resistentes in vivo y no se debe utilizar este antibiótico.
Lectura crítica del antibiograma

Un antibiograma debe interpretarse ya que los resultados in vitro no siempre son reproducibles in vivo . Por ejemplo, si un Staphylococcus aureus ( Staphylococcus aureus ) es resistente a la oxacilina (antes meticilina), debe considerarse resistente a todos los betalactámicos (todas las penicilinas y cefalosporinas se vuelven inutilizables). Esta bacteria se llama MRSA ( Staphylococcus aureus resistente a la meticilina , MRSA en inglés).

Uso diario del antibiograma

El antibiograma es una herramienta validada por un biólogo médico que le permite al médico elegir el antibiótico adecuado o la combinación de antibióticos para tratar eficazmente a un paciente. Sin embargo, la mayoría de las veces no es necesario porque muchas infecciones se tratan eficazmente de forma probabilística. Hacemos una hipótesis sobre el antibiótico y las bacterias a tratar según el lugar de infección (amígdalas, abdomen, pulmón ...) porque muchas veces son las mismas especies que se encuentran en los mismos lugares. Se realiza un antibiograma en casos de infecciones graves (shock séptico, infecciones nosocomiales, etc.) o cuando los antibióticos elegidos de forma probabilística no funcionan. Esta actitud da como resultado el uso repetido de los mismos antibióticos y contribuye a la aparición de cepas resistentes.

De la muestra al antibiograma

Las bacterias se recogen:

  • en la sangre. Luego se colocan en cultivo (hemocultivo);
  • en la orina, excrementos;
  • en las heces, heces;
  • en el esputo, lavados broncoalveolares (se lavan los bronquios con agua durante la endoscopia y se analiza este líquido de lavado);
  • en el líquido cefalorraquídeo, que baña el cerebro, tronco encefálico, cerebelo y médula espinal,  etc.

Las bacterias se cultivan y luego se identifican: se determina si se trata de estafilococos, estreptococos,  etc. Luego, es el biólogo quien decide si es necesario realizar un antibiograma.

La realización práctica del antibiograma

  • El antibiograma suele estar automatizado. Las bacterias se suspenden (en un líquido) en un recipiente, luego la máquina succiona este líquido y lo deposita en una tarjeta (tamaño tarjeta de crédito) en la que hay pequeñas áreas correspondientes a cada antibiótico. La máquina luego lee esta tarjeta y automáticamente da los resultados (sensible, intermedio, resistente).
  • A veces, podemos rehacer un antibiograma para ciertos antibióticos elegidos por el biólogo. O realizamos el procedimiento descrito en 1. O utilizamos otras técnicas más caras pero más sencillas como el E-test. Se inocula una placa de Petri, luego se aplica una tira de prueba E que incluye un gradiente de antibiótico que aumenta de un extremo al otro (sin antibiótico a la izquierda, concentración máxima a la derecha) y estas concentraciones de antibiótico se escriben directamente en esta cinta . Se incuba la placa y se lee la MIC en la intersección del disco de inhibición con la banda.

Interpretación del antibiograma

  • El antibiograma no se devuelve como está. Es necesaria una interpretación de los datos brutos.
  • La resistencia de las bacterias no siempre se expresa. Por tanto, es importante conocer las resistencias naturales.
  • Algunas resistencias son heterogéneas y afectarán solo a una parte de las deformaciones. En este caso, a veces es necesario trabajar en condiciones que favorezcan la expresión de la resistencia.
  • El estudio de los mecanismos de resistencia permite establecer perfiles de resistencia.
  • El antibiograma también es una buena herramienta de orientación para determinadas cepas que son difíciles de identificar.

NB: Los distintos discos de antibióticos utilizados para realizar el antibiograma en fase sólida sobre agar llevan abreviaturas, de las que se enumeran a continuación:

Codificado Antibiótico
SOY Ampicilina
AMC Amoxicilina + ácido clavulánico
AMX Amoxicilina
AÑO Amikacina
Cajero automático Aztreonam
VS Cloranfenicol
CAZ Ceftazidima
CD02 Ceftazidime + Ac. Clavulánico 02
CD03 Ceftazidime + Ac. Clavulánico 03
CF Cefalotina
CIP Ciprofloxacina
CPO Cefpiroma
CS Colistina
CTX Cefotaxima
CXM Cefuroxima
mi Eritromicina
FA Acido fusidico
FEP Cefepima
FOS Fosfomicina
ZORRO Cefoxitina
PIE Nitrofurano -furano
GEN Gentamicina 500
GM Gentamicina 500
DIABLILLO Imipenem
K Kanamicina
KAN Kanamicina 1000
L Lincomicina
LVX Levofloxacina
MI Cefamandol
MOX Moxalactama - Latamoxef
MXF Moxifloxacino
NO Neomicina
N / A Ácido nalidíxico
NI Norfloxacina
OFX Ofloxacina
BUEY Oxacilina
PAG Penicilina
PEF Pefloxacina
Pepita Piperacilina
PT Pristinamicina
REAL ACADEMIA DE BELLAS ARTES Rifampicina
SPX Esparfloxacino
SXT Cotrimoxazol = Trimetoprim + Sulfametoxazol
TCC Ticarcilina + Ac. Clavulánico
USTED Tetraciclina
TEC Teicoplanina
TIC Ticarcilina
TM Tobramicina
TZP Piperacilina + Tazobactam - Tazocilina
IR Vancomicina