Reacción en cadena de la polimerasa anidada

La reacción en cadena de la polimerasa anidada  (PCR anidada ), también llamada PCR anidada , es una modificación de la PCR clásica para reducir la cantidad de productos inespecíficos que resultan de la unión de los cebadores a sitios inesperados.

La reacción en cadena de la polimerasa en sí misma es un proceso que permite que las secuencias de ADN se amplifiquen mediante el uso de una ADN polimerasa termorregulada. El producto se puede utilizar para secuenciación o análisis y este proceso es la piedra angular de muchas aplicaciones de investigación y de laboratorio de la genética, como la ciencia forense o la toma de huellas dactilares de ADN. La PCR convencional requiere cebadores complementarios a los extremos del ADN diana. La unión de cebadores a sitios incorrectos es un problema recurrente que da como resultado la amplificación de secuencias inesperadas.

Así, la PCR anidada permite, mediante la implicación de dos pares de cebadores utilizados sucesivamente, limitar este fenómeno, suponiéndose que el segundo par de cebadores amplifica una secuencia ubicada dentro del producto de la primera PCR.

Pasos

  1. El ADN diana se somete a la primera PCR con un primer par de cebadores (en verde en el diagrama). Entre los diferentes productos de PCR obtenidos, solo uno contiene la secuencia esperada.
  2. El producto de la primera reacción se somete a una segunda PCR con un segundo par de cebadores, aquí en rojo. Es muy poco probable que el producto inicialmente no deseado contenga los sitios de unión para este segundo par de cebadores, asegurando que el producto de la segunda PCR esté muy poco contaminado con el producto no deseado de los dímeros del cebador, estructuras en horquilla o secuencia diana alternativa.

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